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elisa试剂盒的必要条件
发布时间:2017-10-17 点击次数:888次

elisa试剂盒的必要条件

1.的试剂,杰出的仪器和正确的操作是保证ELISA检测效果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的构成不同而有所差异,国内医学查验一般均用板式点。本文将叙说板式ELISA各个操作进程的留心关键,珠式、管式及磁性球ELSIA,国外试剂均与特别仪器协作运用,严峻遵从规矩操作,必能得出准确的效果。 

2.可用作ELISA试剂盒的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其间某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均对等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只需待血清天然凝聚、缩短后即可取得。除特别状况外,在医学查验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可对等运用。

3. 血清标本可按常规办法搜集,应留心避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为符号的ELISA测定中,溶血标本可能会添加非特异性显色。  

4.血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会发生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其间的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。 

5.一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超越一周测定的需低温冰存。冻住血清融解后,蛋白质部分浓缩,分布不均,应充沛混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上激烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。重复冻融会使抗体效价下跌,所以测抗体的血清标本如需保存作屡次检测,宜少量分装冰存。保存血清自搜集时就应留心无菌操作,也可参与恰当防腐剂。  

5.按试剂盒说明书的要求准备试验中需用的试剂。ELISA试剂盒顶用的蒸馏水或去离子水,包含用于洗刷的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液运用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后运用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。

6.在ELISA中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留心不可溅起,不可发生气泡。

7.加标本一般用微量加样器,按规矩的量参与板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以发生穿插污染,也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法ELISA)需用稀的血清,可在试管中按规矩的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中参与稀释液,再在其参与血清标本,然后在微型轰动器上轰动1分钟以保证混和。加酶结合物运用液和底物用液时可用定量多道加液器,使加液进程敏捷结束。


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